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方案概述

前言：

異噻唑啉酮類防腐劑是一類高效、廣譜的化學防腐劑，屬于有機雜環(huán)類化合物，憑借獨特的化學結(jié)構(gòu)，具備強大的生物活性。在水溶液中，它會緩慢釋放出活性基團，這些基團能夠有效抑制和殺滅多種微生物，涵蓋細菌、真菌和藻類等。因其高效、廣譜的抗菌性能，異噻唑啉酮類防腐劑在眾多行業(yè)都備受青睞，廣泛用于工業(yè)和日化領(lǐng)域。

本次試驗參考《中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準SN/T 5723-2024》，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3400系列配置紫外檢測器進行檢測。試驗結(jié)果顯示，系統(tǒng)適應(yīng)性中各組分峰峰型良好，分離度良好，滿足試驗要求；各組分峰線性相關(guān)系數(shù)R值在0.999以上；化合物MI、CMI、BIT、OI和DOCI保留時間重復(fù)性分別為0.040%、0.082%、0.075%、0.064%和0.052%；峰面積重復(fù)性分別為0.277%、0.492%、0.353%、0.371%和0.204%，重復(fù)性良好；在陰性樣品中添加5ppm和10ppm的標準品濃度，紙巾紙和衛(wèi)生紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑的回收率均在90.54%~105.25%之間，回收率良好；MI、CMI、BIT、OI和DOCI的檢測限理論結(jié)果分別為28.46ng/mL、14.20ng/mL、35.50ng/mL、19.35ng/mL和57.35ng/mL；樣品測試某品牌紙巾紙和衛(wèi)生紙中均未檢出相應(yīng)的5種異噻唑啉酮類防腐劑；以上數(shù)據(jù)均滿足藥典方法對于儀器的要求。

關(guān)鍵詞：異噻唑啉酮類；防腐劑；高效液相色譜法。

1.儀器設(shè)備及試劑

1.1液相配置清單

表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單

序號	名稱	數(shù)量
1	UV3400 紫外檢測器	1臺
2	P3400B 四元低壓恒流泵	1臺
3	CT3400 柱溫箱	1臺
4	AS3400 全自動進樣器	1臺
5	SmartLab CDS 色譜使用工作站	1套
6	C18 250x4.6 mm，5 μm	1個

1.2試劑及標準品清單

表2 試劑及標品清單表

序列	試劑及標準品	純度
1	甲醇	HPLC級
2	2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（MI）	98.3%
3	5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（CMI）	99.6%
4	1,2-苯并異噻唑啉-3-酮（BIT）	99.8%
5	2-正辛基-4-異噻唑啉-3-酮（OI）	99.4%
4	4,5-二氯-2-正辛基-4-異噻唑啉-3-酮（DOCI）	99.7%

1.3實驗材料及輔助設(shè)備

超聲波清洗機；

渦旋混合器；

分析天平。

2.實驗方法

2.1溶液配制

2.1.1 標準儲備溶液：分別精密稱取各標準品適量，置不同50mL容量瓶中，用甲醇溶解，分別制成200mg/L的標準儲備溶液。

2.1.2 標準工作液：分別精密移取各標準儲備溶液適量，置不同容量瓶中，用甲醇稀釋溶解并定容至刻度線，搖勻。（標準品濃度范圍2μg/mL~50μg/mL）

2.1.3 樣品溶液：精密稱取1g(準確至±0.01g)樣品至50mL具塞離心管中，加入20mL甲醇，渦旋混合均勻后，超聲提取30min，取上清液過0.22μm有機濾膜，上機測定。

2.1.4 回收率溶液1：精密稱取1g（準確至±0.01g）樣品至50mL具塞離心管中，加入各標準品儲備溶液1mL，再加入15mL甲醇，渦旋混合均勻后，超聲提取30min，取上清液過0.22μm有機濾膜，上機測定。

2.1.5 回收率溶液2：精密稱取1g（準確至±0.01g）樣品至50mL具塞離心管中，加入各標準品儲備溶液1mL，再加入35mL甲醇，渦旋混合均勻后，超聲提取30min，取上清液過0.22μm有機濾膜，上機測定。

3.實驗結(jié)果

3.1專屬性

圖1 5種異噻唑啉酮類防腐劑色譜圖（10μg/mL、276nm）

圖2 5種異噻唑啉酮類防腐劑色譜圖（10μg/mL、316nm）

說明：20分鐘內(nèi)完成5種異噻唑啉酮類防腐劑的測定，各峰均有良好的峰型，分離度良好，符合試驗測定需求。

3.2線性范圍

圖3 5種異噻唑啉酮類防腐劑標準曲線圖

說明：取適量異噻唑啉酮類混合標準溶液，逐級稀釋到系列濃度制作標準曲線，線性范圍2~50μg/mL，各標準品線性相關(guān)系數(shù)R值均在0.999以上，各組分線性良好。

3.3重復(fù)性測試

圖4 6針標準品重復(fù)性測試疊加圖(10μg/mL)

表3 6針標準品重復(fù)性測試數(shù)據(jù)(10μg/mL)

化合物	保留時間（min）	峰面積（mAU*s）
2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（MI）	4.088	608.466
	4.088	607.026
	4.087	608.961
	4.090	611.557
	4.085	607.780
	4.088	610.412
平均值	4.088	609.034
RSD(%)	0.040	0.277
5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（CMI）	8.203	308.971
	8.208	309.166
	8.202	309.639
	8.203	311.069
	8.202	307.100
	8.188	311.225
平均值	8.201	309.528
RSD(%)	0.082	0.492
1,2-苯并異噻唑啉-3-酮（BIT）	8.642	250.285
	8.647	251.784
	8.642	251.191
	8.642	251.811
	8.642	251.581
	8.628	253.004
平均值	8.641	251.609
RSD(%)	0.075	0.353
2-正辛基-4-異噻唑啉-3-酮（OI）	10.610	418.527
	10.615	416.020
	10.610	419.761
	10.608	417.854
	10.610	420.475
	10.595	418.345
平均值	10.608	418.497
RSD(%)	0.064	0.371
4,5-二氯-2-正辛基-4-異噻唑啉-3-酮（DOCI）	13.480	212.074
	13.485	211.124
	13.480	211.938
	13.478	211.850
	13.482	212.385
	13.465	211.591
平均值	13.478	211.827
RSD(%)	0.052	0.204

說明：化合物MI、CMI、BIT、OI和DOCI保留時間重復(fù)性分別為0.040%、0.082%、0.075%、0.064%和0.052%；峰面積重復(fù)性分別為0.277%、0.492%、0.353%、0.371%和0.204%，重復(fù)性良好。

3.4回收率測試

圖5 紙巾紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑回收率測試疊加圖

表4 紙巾紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑回收率測試數(shù)據(jù)

	紙巾紙
	5ppm		10ppm
化合物名	A	回收率(%)	A	回收率(%)
MI	275.720	90.543	585.766	96.180
CMI	147.330	95.197	308.252	99.588
BIT	124.102	98.647	244.092	97.012
OI	198.699	94.958	411.092	98.231
DOCI	111.478	105.254	209.750	99.019

圖6 衛(wèi)生紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑回收率測試疊加圖

表5衛(wèi)生紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑回收率測試數(shù)據(jù)

	衛(wèi)生紙
	5ppm		10ppm
化合物名	A	回收率(%)	A	回收率(%)
MI	187.427	100.953	367.692	99.024
CMI	94.944	97.151	190.771	97.603
OI	127.046	98.894	253.581	98.695
DOCI	64.740	98.286	130.279	98.893
BIT	74.221	96.429	151.552	98.449

說明：在陰性樣品中添加5ppm和10ppm的標準品濃度，按照上述方法進行分析，5種異噻唑啉酮類防腐劑的回收率均在90.54%~105.25%之間，回收率良好。

3.5檢測限測試

圖7 異噻唑啉酮類防腐劑標準品測試譜圖(100ng/mL)

表6 異噻唑啉酮類防腐劑標準品測試數(shù)據(jù)(100ng/mL)

化合物名	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	信噪比	濃度（ng/mL）
MI	4.113	2.699	12.955	122.88
CMI	8.218	2.144	21.044	99.60
BIT	8.667	0.909	10.499	124.25
OI	10.628	2.391	19.321	124.63
DOCI	13.513	1.034	6.526	124.75